Recherche de légionelles par biologie moléculaire : PCR
La PCR en temps réel est une technique de biologie moléculaire. C'est une technique d'amplification génique. Elle permet d'objectiver un gène précis ou un fragment d'ADN, même présent en infime quantité, puis de le multiplier rapidement.
L'échantillon d'un litre d'eau est filtré. Cette étape permet de récupérer les légionelles. On procède ensuite à l'extraction et à la purification de leur ADN par lyse enzymatique et filtration sur colonnes.
L'ADN cible est ensuite amplifié en utilisant des amorces spécifiques (amplification du gène MIP de Legionella pneumophila).
La phase de détection fait appel à une sonde d'hybridation fluorescente. L'intensité de la fluorescence est proportionnelle à la quantité d'ADN de légionelles. On détermine le nombre de copies génomes. La limite de détection est de 100 copies génome par litre.
Cette technique très rapide permet un rendu des résultats en 24 à 48h.
Elle est normalisée par l'AFNOR : Norme T90-471.
Cette méthode détecte des bactéries viables éventuellement non cultivables ainsi que des bactéries cachées dans des amibes. Il n'y a pas de problèmes de bactéries interférentes empêchant la quantification. Il s'agit donc d'une technique très spécifique et très sensible.
Par ailleurs, notre Laboratoire est accrédité par le COFRAC et agréé par le Ministère de la Santé pour la recherche de légionelles par la technique microbiologique (Norme NF T 90-431) : résultats en 10 à 15 jours.
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